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  在實驗條件（包含試劑）較難確保安穩(wěn)的情況下，這種判別法較為適宜。在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這兒的P不代表陽性（positive），而是?。╬atient）的縮寫，不應誤解。為避免稠濁，更宜用S/N表明。在前期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性規(guī)范，現(xiàn)多為各種測定所沿襲。
  實際上每一測定系統(tǒng)應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應留心的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，致使反應后發(fā)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。陽性判定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判別效果陽性或陰性的規(guī)范。ELISA試劑盒用此法判別效果要求實驗條件十分安穩(wěn)，陽性和陰性的對照品應符合必定的規(guī)范，須配用精密的儀器，并嚴峻按規(guī)矩操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對很多標本的實驗檢測而得到的。
  現(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿，陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml。每次實驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先核算陰性對照A值的平均數(shù)（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個特定的數(shù)值（例0.400），實驗才有用。3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)劃，則棄去，算了另兩個陰性對照從頭核算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上規(guī)劃，則該次實驗無效。陽性判定值按下式核算： 
  陽性判定值=NCX+0.05 標本A值＞陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。應留心的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，ELISA試劑盒而不是對各種試劑均可通用。
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