ELISA試驗(yàn)的作用可不能*依靠試劑盒產(chǎn)品，在我公司確保產(chǎn)品質(zhì)量的一起，您還需求留意保存、樣本、操作等等。今日研域(上海)化學(xué)帶您來(lái)看ELISA技術(shù)培訓(xùn)之檢測(cè)樣品的處理技巧！供參閱。
一、細(xì)胞裂解液
① 吸去培育板內(nèi)的培育基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培育基將細(xì)胞從培育板上吹下來(lái)。懸浮細(xì)胞可省掉。
② 搜集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培育基，用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
③ 參加適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前參加蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。一般6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需求150~250μL PBS重懸。
④ 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫凍結(jié)樣品，重復(fù)凍融幾回，使細(xì)胞充沛裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以到達(dá)裂解的意圖。
⑤ 4℃10000×g 離心10min，除掉細(xì)胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。
二、血清
這是*常用于ELISA檢測(cè)的一類(lèi)樣本，處理也比較簡(jiǎn)單。
用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，使血清分出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的分出)4℃1000×g離心20分鐘，仔細(xì)搜集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。
采血過(guò)程中應(yīng)防止溶血，由于紅細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)開(kāi)釋具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。一起也應(yīng)防止細(xì)菌污染，由于菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。
三、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標(biāo)本，標(biāo)本搜集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。防止運(yùn)用溶血或高血脂的標(biāo)本。
常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測(cè)時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說(shuō)明書(shū)，查看試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。
四、細(xì)胞培育上清
取細(xì)胞培育上清到離心管，1000×g離心20min，除掉細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。
五、安排勻漿液
① 將安排樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖刷，洗去安排外表殘留的血液或雜質(zhì)。
② 將安排塊稱(chēng)重，記載后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充沛
③ 將安排按必定的份額參加預(yù)冷的PBS(臨用前參加蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(一般按安排分量：PBS體積=1:9的份額勻漿，例如1g的安排樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS，詳細(xì)體積可根據(jù)試驗(yàn)需求恰當(dāng)調(diào)整，檢測(cè)后計(jì)算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
④ 汲取勻漿液到離心管，4℃5000×g離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。
六、尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min，取上清即可檢測(cè)。
總的來(lái)說(shuō)，由于ELISA只能檢測(cè)可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)確保一切樣本均為弄清的液體，沉積或懸浮物都應(yīng)離心去除。
為了確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。