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特殊的蛋白分子量標準是什么?

2011/4/27 [1071]

特殊的蛋白分子量標準是什么?

下面是關于這類特殊蛋白分子量標準的介紹:
①生物素標記蛋白標準
未染色的Marker在做Western時,需要在印跡前先用麗春紅或者是SYPRO熒光蛋白染色液等不干擾Western Blot的染色方法顯色,在膠上做標記zui后才能“拼”在zui后的結果中,如果是預染的Marker就要在轉膜后標記膜,或者剪膜,zui后在“拼上”。要是想直接將Marker結果顯示在zui后結果上,不用手工作圖或者拼接,那就要Western的Marker了。比如生物素標記的蛋白標準。這種方法主要是配合化學發(fā)光法:在蛋白分子量上標記生物素,通過帶有抗生物素的抗體或者偶聯鏈親霉素的抗體,在化學發(fā)光檢測到目的蛋白帶時就可以同時看到相應的分子量標準一起發(fā)光顯影了。不同于普通蛋白分子量標準的便宜、預染蛋白分子量的方便,這一方法的優(yōu)點是與Marker和目的蛋白對應性好,同時在同張片上顯示,不用拼接,利于分析。缺點是如果樣品中帶有生物素背景,那個抗生物素抗體有可能影響結果,而且反應體系太過復雜也會干擾實驗結果。
②特殊標記蛋白標準
在經過修飾的蛋白標準中,除了生物素標記以外,近些年由于下游蛋白操作的豐富化與復雜化,也出現帶有“尾巴”的蛋白標準。比如His-Tag,如果每個Marker條帶都有His –tag,那二抗添加His-Taq抗體很容易將Marker條帶顯示在Western結果上。