ELISA試劑盒法已經(jīng)普遍應(yīng)用于臨床診斷和檢測(cè)領(lǐng)域，通常所用的就是應(yīng)用相應(yīng)的ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，為了進(jìn)一步提高提高ELISA的檢測(cè)速度，提高檢測(cè)判斷的效率，根據(jù)ELISA原理，本文的介紹中采用了一種ELISA快速法，并初步應(yīng)用于血吸蟲病人血清抗體的檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。
1　材料與方法　
①日本血吸蟲成蟲抗原的制備　
以1500條日本血吸蟲尾蚴經(jīng)皮膚感染家兔，45天后經(jīng)門靜脈灌注收集成蟲，用生理鹽水洗滌后用玻璃勻漿器勻漿，以12000×g離心，收集上清液，測(cè)定其蛋白含量。
②酶聯(lián)SPA結(jié)合物　
購自衛(wèi)生部上海生物制品研究所，臨用前用1ml PBS溶解。
③血清　
50份日本血吸蟲病人血清來自江西省血吸蟲病流行區(qū)，臨用前分別用1∶2，1∶10；1∶20；1∶40的HRP-SPA液將血清稀釋到1∶50的濃度。
④ELISA快速法的建立　
用pH9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋日本血吸蟲成蟲抗原至80μg/ml，每孔50μl包被酶標(biāo)板，4℃放置，第二天用PBS洗滌三次后用含1%BSA的PBS液于37℃封閉45min，用PBST（含0.05%Tween-20）洗板三次；在酶標(biāo)板孔中分別加入用不同稀釋度的酶聯(lián)SPA稀釋到1∶50的病人血清50μl，37℃反應(yīng)60min，再用PBST洗板三次，加入底物鄰苯二胺應(yīng)用液50μl，37℃顯色10min，加入2mol/L的硫酸溶液中止反應(yīng)，觀察結(jié)果，尋找zui適的酶聯(lián)SPA液的工作濃度。
⑤檢測(cè)血吸蟲病人血清抗體　
方法同④，酶聯(lián)SPA的工作濃度為1∶40，病人血清的稀釋度為1∶50。
⑥常規(guī)ELISA檢測(cè)血吸蟲病人血清抗體　
按常規(guī)方法［1］，以每孔50μl日本血吸蟲成蟲抗原包被酶標(biāo)板，4℃放置，第二天用PBST洗板三次后用含1%BSA的PBS 37℃封閉1小時(shí)，用PBST洗板后加入1∶50稀釋的病人血清，37℃反應(yīng)60min，用PBST洗板三次，再加入1∶40稀釋的酶聯(lián)SPA，37℃反應(yīng)60min，洗板后加入底物鄰苯二胺應(yīng)用液，37℃顯色10min，用2mol/L的硫酸終止反應(yīng)，觀察結(jié)果。
2　結(jié)果與討論　
常規(guī)的ELISA試劑盒檢測(cè)血清抗體的方法是將已知的抗原包被在酶標(biāo)板上，與血清中待測(cè)抗體結(jié)合后通過加入酶聯(lián)抗人IgG（HRP-IgG）或酶聯(lián)SPA（HRP-SPA）顯色的兩個(gè)過程來完成的。HRP-SPA與血清中待測(cè)抗體結(jié)合的位點(diǎn)是Ig的Fc段，從理論上講HRP-SPA與Ig的Fc段結(jié)合不會(huì)影響Ig的Fab段與抗原的結(jié)合，或者影響很小，因此可以設(shè)想將抗原與待測(cè)抗體反應(yīng)的過程，待測(cè)抗體與酶標(biāo)二抗反應(yīng)過程在同一反應(yīng)體系中同時(shí)進(jìn)行，從而使整個(gè)反應(yīng)過程減少一步，Sundaram等［2］根據(jù)這一原理設(shè)計(jì)了偶聯(lián)探針Western blot方法，取得了好的實(shí)驗(yàn)效果，我們依據(jù)相同的原理，設(shè)計(jì)了ELISA快速法，用于檢測(cè)血吸蟲病人血清抗體。用該法及常規(guī)ELISA同時(shí)檢測(cè)50份江西省血吸蟲病流行區(qū)病人血清標(biāo)本，49份結(jié)果陽性，1份標(biāo)本為陰性，陰性標(biāo)本均為第7份標(biāo)本，兩種方法的檢 測(cè)結(jié)果*一致。
抗原與待測(cè)抗體反應(yīng)的過程，待測(cè)抗體與酶標(biāo)二抗反應(yīng)過程在同一反應(yīng)體系中同時(shí)進(jìn)行，因病人血清中存在的非目標(biāo)檢測(cè)抗體會(huì)消耗一部分HRP-SPA，為達(dá)到常規(guī)ELISA檢測(cè)的敏感度，則可能需要增加HRP-SPA的用量，通過測(cè)定HRP-SPA的工作濃度與可檢測(cè)出血清抗體滴度的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)分別按1∶2，1∶10，1∶20，1∶40稀釋的HRP-SPA，能測(cè)出混合陽性血清zui高滴度均為1∶12800，與常規(guī)的ELISA的檢出滴度相同，因此ELISA快速法并不需要增加HRP-SPA的用量，常規(guī)使用時(shí)只要按廠家推薦的1∶40的工作濃度使用即可獲得滿意的使用效果。
ELISA試劑盒快速法的抗體檢測(cè)效果與常規(guī)ELISA相同，檢測(cè)條件亦一致，檢測(cè)時(shí)間則可明顯縮短，可顯著提高工作效率，對(duì)提高抗血吸蟲抗體以及其它血清抗體檢測(cè)方法的檢測(cè)速度方面將會(huì)有一定的實(shí)用價(jià)值。